产品货号:
RFT381
中文名称:
D500 DNA ladder(50~500bp)
英文名称:
D500 DNA marker(50-500bp)
产品规格:
100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品是由9条精准定量的带状双链DNA条带组成,适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的定量分析。产品中已含有1×loading buffer,可根据实验需要,直接取2~5μL电泳,使用方便,电泳图像清晰。
取5μL上样,9条带的大小和含量分别为50、100、150、200、250、300、350、400、500bp,其中250bp条带加亮显示。
- 琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响,电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。由于PAGE电泳的特殊性,该产品不建议用于PAGE电泳。
- 使用与电泳缓冲液一致的缓冲液融化琼脂糖,例如使用1×TAE缓冲液电泳,需使用1×TAE缓冲液溶胶。
- 多次电泳后缓冲液电导增强,相同电压下电流增大,导致分辨率降低,并且明显产热,严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。
- 推荐使用RealGood系列染料(货号:RFT232、RFT233、RFT270)染色。如果使用Goldview或EB等染料进行染色,由于此类染料带更多的正电荷(染料移动方向与核酸泳动方向相反),随着电泳时间延长,染料向大片段聚集,凝胶会出现阴阳胶现象(染料含量高的凝胶紫外下较亮,含量低的凝胶紫外下发暗),导致小分子量DNA显色很弱或不可见。阴阳胶可以在电泳结束后浸泡染色,将胶浸没在含1μg/mL EB或Goldview的电泳缓冲液中20~25min,小分子量DNA会显色清楚。更长时间浸泡会因DNA分子扩散而使条带弥散,小分子量DNA更易弥散。
- 紫外照射下EB易分解,使DNA条带荧光变浅。DNA受紫外光照射形成嘧啶二聚体,不利于待回收片段的下游工作,因此尽可能减少紫外照射时间。
- 蔗糖会结合DNA,降低其电泳迁移率,建议DNA样品上样使用含甘油的Loading Buffer。
- 大部分核酸工具酶会结合DNA,降低其电泳迁移率,大分子量DNA尤为明显。
- 取2~5μL本制品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中(每1mm×1mm加样孔加1μL,如果加样孔宽于5mm,可以适当增加上样量)进行电泳。
- 建议电泳条件:凝胶浓度为2.0%,凝胶长度5~7cm,电泳电压~7V/cm,电泳时间30~35分钟。
- 通过核酸染料染色后紫外灯或蓝光仪下观察条带。
DNA在琼脂糖凝胶中的有效分离范围
琼脂糖浓度%(w/v) | 双链DNA有效分离范围(bp) | 优选电泳缓冲液 | 示踪染料相当于双链DNA片段粗略大小(bp) | |||
溴酚蓝 | 二甲苯菁 | |||||
TBE | TAE | TBE | TAE | |||
0.5 | 2000~50000 | 1×TAE | 750 | 1150 | 13000 | 16700 |
0.8 | 800~10000 | 1×TAE | 320 | 530 | 4830 | 6500 |
1.0 | 400~8000 | 1×TAE | 220 | 370 | 3030 | 4160 |
1.2 | 300~7000 | 1×TAE/0.5×TBE | 160 | 275 | 2070 | 2890 |
1.5 | 200~3000 | 1×TAE/0.5×TBE | 110 | 190 | 1300 | 1840 |
2.0 | 100~2000 | 0.5×TBE | 65 | 120 | 710 | 1040 |
3.0 | 25~1000 | 0.5×TBE | 30 | 60 | 300 | 460 |
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